За уобичајене петријеве посуде са стакленим дном на тржишту, обично се направи рупа на дну пластичне петријеве посуде, а затим се на дно посуде залепи покривно стакло или предмет за ћелију дебљине 170-220 μм. петријева посуда са лепком без сенке или силика гелом. Није цело дно Петријеве посуде од стакла. Подручје погодно за посматрање је само у пределу перфорације. Међутим, због хидрофобности стакла, приликом култивисања ћелија, ћелије не могу добро да приањају за стакло, а стање раста није добро, па се чак и феномен ћелијске деламинације јавља током конфокалног скенирања.
Да би ћелије добро пријањале, потребно је потврдити да су специфични протеински реагенси обложени пре употребе посуда са стакленим дном за ћелијску културу.
уради сам јорган
Различите ћелијске културе захтевају различите реагенсе за облагање. Истовремено, пошто је протеин који се користи за облагање биолошки производ, чистоћа производа и доза протеина за облагање различитих компанија су различите. Овај технички пост је само за референцу. Специфична доза реагенаса за облагање треба да се односи на упутства коришћених брендова. . И најбоље је да урадите експеримент са градијентом са реагенсима које користите да бисте пронашли најприкладнију концентрацију премаза.
Ево примера поли-Л-лизина (ПЛЛ, сигма, П4832, 100 уг/мл):
ПЛЛ премаз је погодан за огромну већину ћелија, посебно за културу неурона у централном систему. Потребно је направити садржај протеина (уг/цм2) по јединици површине да би се достигла жељена количина током употребе. Препоручена количина премаза за ПЛЛ у овом примеру је 2 уг/цм2. Потребно је израчунати потребну количину протеина према површини премаза и запремини премаза.
На пример: Петријева посуда са стакленим дном од 35 мм, површина раста ћелија је 3,5 цм2, површина премаза је 4,1 цм2, а запремина раствора за облагање је 400 ул, тада је препоручена доза 2 уг/цм2. Тада је потребно 8,2 уг ПЛЛ-а у једној јажици. Ако се дода само 400 ул ПЛЛ раствора, концентрација ПЛЛ раствора је 20,5 уг/мл (око 20 уг/мл). Због тога, основни раствор треба разблажити ултра чистом водом.
Конкретни кораци:
1. Разблажите основни раствор ПЛЛ-а 1:5 са ултра чистом водом.
2. Додајте 400 ул ПЛЛ разблажења у сваку Петријеву посуду са стакленим дном од 35 мм.
3. Инкубирајте 1-2 сати на собној температури и аспирирајте ПЛЛ разблажење.
4. Пажљиво исперите 3 пута са 2мл раствора ПБС или медијума без серума и аспирирајте раствор за прање.
5. Директно додајте суспензију ћелија за култивацију.
Метода евалуације
Због различитих својстава различитих протеина омотача, различити протеини омотача се користе на различите начине. Нова контаминација се често ствара због потребе да се посуде са стакленим дном премазују. Штавише, контаминација се често открива након подизања ћелија, што не само да одлаже време, већ и троши потрошни материјал комплета. На крају крајева, обложени протеински реагенси и посуде са стакленим дном са загарантованим квалитетом су скупе (посуде са стакленим дном лошег квалитета могу да процуре јер лепак није лепљив или је лепак који се користи отрован за ћелије).
Конфокалне Петријеве посуде без премаза
За децу која желе да уштеде време и труд, погодније је користити јела за конфокалну културу без премаза.
Фактори које треба узети у обзир при избору одговарајуће посуде за културу су: да ли је погодна за ваше ћелије да се придржавају, да ли оптичке карактеристике посуде за културу испуњавају конфокалне захтеве.
Петријеве посуде које испуњавају захтеве наведених фактора нису ограничене на посуде са стакленим дном. У ствари, сви знају да је пластично посуђе јефтиније и да се ћелије лакше придржавају од стакла. Ево примера конфокалне посуде за културу из Шангаја Јинган, да бисмо говорили о параметрима које треба да има посуда за културу која је погодна за конфокалне експерименте:
Може се видети да су физички параметри посуда за конфокалну културу који испуњавају захтеве директне употребе веома блиски стаклу, али истовремено имају и хидрофилна својства, што може учинити да већина ћелија боље пријања; и дуктилност су бољи од стакла. Омогућава већини ћелијских линија и примарних ћелија да се директно приањају за зид и није крхка, што је добар избор.
Такође можете пронаћи најприкладнију посуду за конфокалну културу за свој експеримент у складу са вашим специфичним експерименталним захтевима и параметрима у горњој табели.
Метода евалуације
Избор ове врсте петријеве посуде не захтева додатни премаз, што значајно смањује ризик од контаминације. А пошто је пластично дно лакше радити, није потребан лепак да се причврсти на дно петријеве посуде. Елиминишите могућност цурења или цитотоксичности.