Плоче са ћелијском културом се обично користе и важан су потрошни материјал у експериментима са ћелијском културом јер могу да уштеде време и материјале реагенса за експерименте са ћелијама, и могу да подесе више динамичких варијабли у исто време како би се олакшало посматрање и откривање.
плоча за културу
1. Поклопци 96, 24-плоча за културу или петријевих посуда су веома лабави, што је погодно за вентилацију, али да ли ће бактерије, плесни и други загађивачи такође уклизати унутра?
Одговор: (1) Поклопац је веома лабав и припада полуотвореној култури. Сврха овога је да дише (заправо, да омогући да се ЦО2 изван посуде за културу у потпуности размени са посудом за културу како би се одржала пХ вредност медијума).
(2) Постоје предности и недостаци, што повећава могућност загађења. Поред тога, то доводи до испаравања течности у петријевој посуди, што је значајно за прецизно дозирање лекова. Дакле, неопходне су следеће две мере:
а) Ваздух у инкубатору мора бити чист (редовно ултраљубичасто светло, рибање алкохолом, а инкубатор треба што мање укључивати и искључивати)
б) Влажност у инкубатору мора се стално одржавати на 100 посто (судопер у који се ставља стерилна дестилована вода у инкубатору). Обратите пажњу на асептични рад!
2. Моје ћелије су инокулисане на плочи за културу, а ћелије се увек окупљају у периферном делу. Шта бих требао да урадим? Видим да су ћелије неких сабораца скупљене у средини. Да ли је проблем са квалитетом плоче?
О: Како мешате своје ћелије? Да ли пипета дува или тресе плочу за културу? Ако је у питању ово друго, а протресе се у круг, врло је вероватно да ће ћелије бити одбачене у околни део услед центрифугалне силе, што ће резултирати средином ћелија. Мање, више од четири недеље! Можете и сами да пробате!
Добар начин: пре него што култивишете плочу за семе, ставите плочу за културу у инкубатор на неколико сати засићења, а затим је извадите. Приликом засијавања ћелија, сила треба да буде лагана. Можете користити капаљку са стране отвора плоче за културу полако додавати да бисте омогућили ћелијској суспензији да тече у бунарчиће плоче, а култивисане ћелије расту суштински уједначено. Не заборавите да никада не тресите осцилатор или ће се ваше ћелије згрудати као што сте рекли.
3. Моје ћелије се прослеђују нормално, али када једна врста уђе у плочу са шест отвора (без обзира на додавање лека и контролу), увек постоје две или три ћелије (случајне) ћелије које не расту добро, мале су и изгледају бити сломљен. Да ли се неко сусрео са овим? Шта је разлог?
О: То може бити повезано са температуром течности коју додајете. Ако су ваше ћелије управо извађене да бисте променили медијум и додали медијум, а медијум се ускоро извади и из фрижидера од 4 степена, ћелије ће се лако смрзнути до смрти. Препоручује се да најбоље инкубирате медијум у инкубатору 15 минута.
Поред тога, то је такође повезано са стањем раста ваших ћелија. Ћелије пре дозирања могу се инкубирати са високим концентрацијама у серуму. Уверите се да су ћелије у добром стању.
Или се може инкубирати у воденом купатилу од 37-степена, или је проблем саме плоче за културу, можете пробати другу плочу за културу. Друга могућност је проблем са стањем ћелије, подесите концентрацију серума приликом засијавања плоче.
4. Последњих дана користио сам плочу за културу са шест отвора за инокулацију ћелија. После култивисања током 24 сата, променио сам медијум. Пре промене медијума приметио сам да су ћелије приањале за зид и да је стање било веома добро. Након промене медијума, одмах сам користио микроскоп. Примећено је да скоро половина ћелија у сваком бунарчићу показује стање близу смрти. Ћелије постају веома мале и производе много остатака, док је друга половина ћелија нормална, постоји развод између абнормалних ћелија и нормалних ћелија, горњи полукруг је добар, доњи полукруг није добар, како је ово? Шта је било?
О: Можете видети да ли постоји неки од следећих разлога
а. Плоча за културу није постављена хоризонтално;
б. Шта је са вашим медијумом за културу, ако медијум за културу истекне, ћелије се неће придржавати. Пробајте свеже припремљен медијум
ц. Можда је проблем у плочици. Није проблем променити тањир другог бренда или користити боцу културе.
д. Да ли сте обраћали пажњу на утицај вентилатора при промени медијума, посебно када постоји много плоча за културу које треба заменити, лако је проузроковати смањење и пуцање ћелија услед ветра и губитка воде. Ако јесте, медијум треба мењати један по један, и немојте се плашити да потрошите пипету, обратите пажњу на ефикасност операције!
5. Прошла су четири дана откако су ћелије дигестиране и инокулисане у 24-плочу са бунарима, а средњи део сваког бунара је увек био пун. Медијум је испран ПБС-ом сваког дана, а иста ситуација се десила када је медијум промењен следећег дана. Ивице су добро дугачке, а центар је пун мртвих ћелија?
Одговор: Ако су ћелије густе около и ретке у средини, постоје отприлике следећи разлози:
Медијум је додато премало. Углавном због проблема напетости течности.
Да ли има мање воде на дну инкубатора;
Тресење након сејања ћелија било је превише. Ћелије су распоређене около због центрифугалне силе.
Кључ за то да ли су ћелије равномерно распоређене је да свака врста ћелија има индивидуалне разлике, а операције ћелија других људи можда нису погодне за вас. Дакле, морате сами истражити и пронаћи скуп правила која су јединствена за ваше ћелије. Имате следеће искуство:
(1) Све суспензије ћелија које се постављају морају се мешати пипетом пре сетве.
(2) Према евиденцији, запремина течности 24- плоче бунара је 1мл, у ствари, запремина од 1мл је довољна.
(3) Приликом инокулације, полако додајте узорак и не заборавите да лагано ротирате врх пипете. Узорак се не може додавати пребрзо како би се избегло да се ћелије нагомилају на једној тачки додавања узорка, и обратите пажњу на додавање узорака у различите делове, односно док додајете покретни пиштољ. Глава, вештачки чине ћелије имају тенденцију да буду равномерно распоређене. То утиче на равномерну дистрибуцију ћелија.
