PCR detekcija
Lančana reakcija polimeraze (PCR) koristi deo DNK kao šablon, a uz učešće DNK polimeraze i nukleotidnog supstrata, DNK se umnožava na dovoljnu količinu za strukturnu i funkcionalnu analizu. Metoda PCR detekcije ima izuzetno važan značaj u kliničkoj brzoj dijagnostici bakterijskih zaraznih bolesti.
Princip PCR se koristi za amplifikaciju fragmenta DNK koji se nalazi između dve poznate sekvence, slično procesu replikacije prirodne DNK. Molekul DNK koji treba da se amplificira se koristi kao šablon, a par oligonukleotidnih fragmenata komplementarnih kraju 5' i 3' kraju šablona se koristi kao prajmer. Pod dejstvom DNK polimeraze, ona prati šablon prema polurezervisanom mehanizmu replikacije. Produženje lanca do završetka nove sinteze DNK, ponovite ovaj proces, ciljni DNK fragment se može pojačati.
(PCR) je metoda za enzimsku sintezu specifičnih fragmenata DNK in vitro. Sastoji se od nekoliko koraka visokotemperaturne denaturacije, niskotemperaturnog žarenja i odgovarajućeg produženja temperature. Karakteristike kao što su visoka osetljivost, jednostavan rad i ušteda vremena. Može se koristiti ne samo u osnovnim istraživanjima kao što su izolacija gena, kloniranje i analiza sekvence nukleinskih kiselina, već i u dijagnostici bolesti ili bilo kog mesta gde postoje DNK i RNK. Lančana reakcija polimeraze (Polymerase Chain Reaction, skraćeno PCR) je takođe poznata kao molekularno kloniranje bez ćelija ili specifična DNK sekvenca in vitro enzimske tehnologije amplifikacije usmerene na prajmer.
Polu-rezervisana replikacija DNK je važan način za biološku evoluciju i prolazak. Dvolančana DNK se može denaturisati i rastopiti u jedan lanac pod dejstvom raznih enzima. Uz učešće DNK polimeraze i promotera, dvolančana DNK se može replicirati u ista dva molekula po principu komplementarnog uparivanja baza. U eksperimentima je utvrđeno da se DNK takođe može denaturisati i rastopiti na visokim temperaturama, a može se ponovo renaturisati u dvostruke lance kada se temperatura snizi. Stoga, kontrolom denaturacije i renaturacije DNK kroz temperaturne promene i dizajniranjem prajmera kao promotera, dodavanjem DNK polimeraze i dNTP-a može se završiti in vitro replikacija specifičnih gena.
Jednostavna stvar je da koristite specijalnu opremu, koristite dNTPS, Mg2+, specifične prajmere, DNK polimerazu i sistem pufera, dodate šablon, koji je uzorak DNK za in vitro amplifikaciju, i izvršite elektroforezu. Ako se može pojačati, a veličina pojačanog proizvoda je u skladu sa ciljnom trakom, to znači da su prajmer i šablon specifični, a indeks detekcije pozitivan.
Metode i koraci PCR detekcije nukleinske kiseline
Testiranje nukleinske kiseline zahteva pet koraka: uzorkovanje, zadržavanje uzorka, zadržavanje, ekstrakcija nukleinske kiseline i kompjutersko testiranje.
Detekcija nukleinske kiseline
Prvi korak je sakupljanje ljudskog sekreta i brisanje nosne šupljine ili zadnjeg zida ždrela i bilateralnih faringealnih krajnika nazalnim testom ili testom ždrela.
U drugom koraku, medicinsko osoblje je zadržalo uzorak, potopilo glavu testa u rastvor za konzervaciju ćelija i zašrafilo poklopac epruvete odmah nakon lomljenja repa.
U trećem delu uzorak stavite u hermetičku kesu, čuvajte i na vreme pošaljite na pregled.
Četvrti korak je slanje uzorka u laboratoriju radi ekstrakcije nukleinske kiseline.
U petom koraku, ekstrakt se podvrgava reakciji fluorescentne PCR amplifikacije.
Takođe su potrebni potrošni materijali i instrumenti
Dodati su PCR instrument, PCR epruveta, vrh pipete, ploča sa dubokim bunarima, rezervoar i reagensi
