ПЦР технологија је слична природном процесу репликације ДНК, а њена специфичност се ослања на олигонуклеотидне прајмере комплементарне са оба краја циљне секвенце. ПЦР се састоји од три основна корака реакције: денатурација, жарење и екстензија. Овај реакциони процес се спроводи у контејнеру за ПЦР реакцију. Уз континуирани развој инструмента за амплификацију гена, реакциони контејнер је такође доживео постепени развој епрувете за центрифугирање од 1,5мл до 0.2мл (0.25мл) до танког зида {{ 7}}.2 мл намењен ПЦР. , 0.1 млпцр епрувета. Са повећањем броја реакција ПЦР амплификације, постепено се формирају контејнери за амплификацију гена високе пропусности за ПЦР траке и ПЦР плоче.
ПЦР се састоји од три основна корака реакције: денатурација-жарење-ектензија
Денатурација шаблонске ДНК:
Након што се ДНК шаблона загреје на око 94 степена током одређеног временског периода, дволанчана ДНК шаблонске ДНК или дволанчана ДНК формирана ПЦР амплификацијама се дисоцира, тако да се може комбиновати са прајмером за припрему за следећу рунду реакције.
Жарење (ренатурација) шаблонске ДНК са прајмерима:
Након што се ДНК шаблона денатурише у један ланац загревањем, а температура се спусти на око 55 степени, прајмери се упарују са комплементарном секвенцом једног ланца ДНК шаблона.
Продужетак прајмера:
Под дејством Так-а, коњугат ДНК шаблон-прајмер користи дНТП као сирови материјал за синтезу новог полурезервираног ланца репликације комплементарног шаблонском ДНК ланцу према принципу упаривања база и полурезервиране репликације.
Основни принципи ПЦР технологије
Технологија се ослања на реакцију ензимске синтезе ДНК полимеразе у присуству ДНК шаблона, прајмера и четири дезоксирибонуклеотида.
ДНК полимераза користи једноланчану ДНК као шаблон за иницирање синтезе са малим комадом дволанчане ДНК. Један или два синтетичка олигонуклеотидна прајмера се комбинују са комплементарном секвенцом у једноланчаној ДНК шаблони да би се формирала делимична дволанчана ДНК.
Под одговарајућом температуром и околином, ДНК полимераза додаје деоксимононуклеотид на 3´-ОХ крај прајмера, и користи ово као почетну тачку да се протеже дуж правца 5´→3´ шаблона да би се синтетизовао нови комплементарни ланац ДНК.
Разлика између ПЦР епрувета и епрувета за центрифугирање
ПЦР епрувете:
ПЦР реакциона плоча је 96-бунар или 384-бунар, који је посебно дизајниран за серијске реакције. Принцип је да је проток ПЦР машине и секвенцера генерално 96 или 384.
Центрифужна цев:
Центрифужна епрувета није нужно ПЦР епрувета. Постоји много врста центрифугалних цеви према њиховом капацитету. Најчешће коришћени су од 1,5 мл, 2 мл, 5 мл, 15 или 50 мл, а најмањи (250 ул) се може користити као ПЦР епрувета.
Како одабрати ПЦР епрувете
Одлучили смо да поставимо ПЦР епрувете у нади да ћемо изабрати најтачнију локацију за температуру.
Најтачнији положај температуре треба да буде положај изнад температурног сензора испод модула (без обзира на нетачну температуру сензора).
Положај сензора температуре различитих ПЦР инструмената је различит.
На пример, АБ-ов 2720 има само један у средини, МЈ-ов 200 има три сензора, који су доњи леви, средњи и горњи десни, Епендорфов треба да буде у реду А или Х, а Донгсхенглонг 811 има три сензора температуре, Б{{3} } треба изабрати , Ц1-2, Ц6-7, Д6-7, Б11-12, Ц11-12, јер су ове тачке температурне тачке.