Медијум за ћелијску културу мора да садржи довољно хранљивих материја да задовољи супстанце и енергију потребне за биохемијске реакције као што су синтеза нових ћелија и ћелијски метаболизам. Главне компоненте медијума за ћелијску културу су вода, аминокиселине, витамини, угљени хидрати, неорганске соли и други помоћни хранљиви састојци. Због тога морамо обратити пажњу на метод стерилизације медијума ћелијске културе и сродне мере предострожности у свакодневним експериментима.
ћелијска култура
1. Методе стерилизације и мере предострожности за различите подлоге за културу ћелија
Методе стерилизације медијума ћелијске културе деле се на стерилизацију у аутоклаву и стерилизацију мембранском филтрацијом. Различити медијуми културе могу имати различите методе стерилизације због различитих хранљивих материја.
Аутоклав
Неки медијуми, као што је МЕМ, могу да се аутоклавирају, ови медијуми углавном не садрже Л-глутамин и натријум бикарбонат и углавном се додају након што је медијум аутоклавиран. Поред тога, глутамат високог притиска (као што је Л-аланил-Л-глутамин) се може користити уместо Л-глутамина. Медијум који се може аутоклавирати је потпуно стерилисан са минималним губитком хранљивих материја на 121 степен, 15 пси и 15 минута, без продужења времена стерилизације.
Већина медија за ћелијске културе није погодна за аутоклавирање. Пошто подлога за културу често садржи витамине, протеине, полипептиде, факторе раста и друге супстанце, ове супстанце су склоне денатурацији или губитку функције под високим температурама или излагањем зрачењу, па се горе наведене течности углавном филтрирају и стерилишу да би се уклониле бактерије. Постоји много филтерских мембрана доступних за филтрацију и стерилизацију, а њихови материјали су углавном ПЕС, најлон, поликарбонат, ацетат целулозе, нитроцелулоза, ПТФЕ, керамика, итд. Стерилизација мембранском филтрацијом је тренутно уобичајена и погодна метода. Често се користе филтерске мембране са 0.2 μм величином пора, а неке користе величину пора 0.1 μм. У поређењу са филтрацијом под високим притиском, мембране имају животни век и скупље су, али су мање деструктивне за хранљиве материје у медијуму ћелијске културе.
2. Мере предострожности током складиштења различитих подлога за културу ћелија
Уопштено говорећи, течни медијум за ћелијску културу не треба да се замрзава на -20 степену, јер хранљиви састојци могу да се таложе током одмрзавања, што ће утицати на ефекат културе. У нормалним околностима, треба га чувати на 2 ~ 8 степени даље од светлости. Пре употребе, извадите га из фрижидера и ставите на собну температуру ради равнотеже. Уобичајени течни медијум важи 6 до 12 месеци. Покушајте да избегнете дуготрајно складиштење течног медијума за културу ћелија. Глутамин у њему ће се полако разградити са продужењем времена складиштења. Ако раст ћелија није добар, можете размотрити тестирање садржаја глутамина у медијуму да бисте утврдили да ли да додате глутамин. . Комерцијално доступан течни медијум за културу ћелија има одређен датум истека. Након употребе медијума за ћелијску културу сувог праха за припрему течности, такође треба да се чува на ниској температури (2 ~ 8 степени). Поред лаке деградације глутамина у медијуму, друге компоненте у медијуму такође могу бити деградиране или преципитиране са повећањем температуре.