Osnovni zahtevi za prikupljanje uzoraka
1. Uzorke hospitalizovanih slučajeva prikuplja medicinsko osoblje bolnice u kojoj se nalaze, a uzorke bliskih kontakata prikuplja lokalna agencija za kontrolu bolesti i medicinska ustanova. Prilikom sakupljanja uzoraka, različite oblasti uzorkovanja treba da budu postavljene prema različitim objektima sakupljanja. Pacijenti sa groznicom idu u klinike za povišenu temperaturu radi lečenja i uzorkovanja. Institucije koje nemaju klinike za groznicu treba da postave posebne oblasti za uzorkovanje za pacijente sa groznicom, kao i da uzorkuju pacijente sa groznicom i druge grupe za testiranje kako bi se izbeglo ukrštanje. infekcija. 2. Asimptomatske inficirane osobe, ulazno osoblje i bliski kontakti treba da uzmu bris nazofarinksa za testiranje nukleinske kiseline tokom izolacije i posmatranja. Dva uzorka nazofaringealnog brisa treba uzeti u isto vreme kada se izolacija oslobodi, a za testiranje treba koristiti različite reagense za detekciju nukleinske kiseline. U principu, sekundarno testiranje sprovode različite institucije za testiranje. 3. U skladu sa potrebama kliničkog i laboratorijskog ispitivanja, tokom hospitalizacije i izolacije može se uzeti više uzoraka, a istovremeno se može uzeti više uzoraka kao što su respiratorni trakt, krv i stolica. Osoblje koje uzima uzorke treba striktno da poštuje specifikacije uzorkovanja za prikupljanje uzoraka kako bi se osiguralo da kvalitet prikupljenih uzoraka ispunjava zahteve. Istovremeno, oni treba da detaljno zabeleže informacije o ispitaniku, a mogu koristiti skeniranje bar kodova i druge metode informisanja za prikupljanje relevantnih informacija. 4. Za skrining populacije, epruvete za uzorkovanje treba da se odrede u skladu sa zahtevima reagensa koji se koriste za ekstrakciju i detekciju nukleinske kiseline, a mogu se odabrati epruvete za uzorkovanje koje sadrže agense za inaktivaciju virusa (gvanidinske soli ili surfaktante, itd.). Uzorak koji se koristi za izolaciju virusa treba staviti u epruvetu za uzorkovanje koja ne sadrži agens za inaktivaciju virusa. 5. Predmeti i praćenje životne sredine treba da se zasnivaju na svrhe praćenja i prevencije i kontrole treba da se odrede predmeti uzorkovanja, lokacija i količina, uzorkovanje treba striktno da prati specifikacije uzorkovanja.
(4) Vrste prikupljenih primeraka. Svaki slučaj mora prikupiti uzorke akutnog respiratornog trakta (uključujući uzorke gornjih ili donjih disajnih puteva). U teškim slučajevima, prvo se uzimaju uzorci iz donjeg respiratornog trakta; uzorci stolice, uzorci pune krvi, uzorci seruma i fekalni uzorci mogu se uzeti u skladu sa kliničkim potrebama. Uzorak urina. Artikli i uzorci životne sredine se prikupljaju u skladu sa zahtevima praćenja.
Vrste uzoraka: 1. Uzorci gornjih disajnih puteva: uključujući bris nazofarinksa, bris grla, itd. 2. Uzorci donjih disajnih puteva: sputum dubokog kašlja, tečnost alveolarne lavaže, tečnost za ispiranje bronhija, aspirat respiratornog trakta, itd. 3. Uzorci stolice/anal brisevi: treba sakupiti oko 10 grama (veličine kikirikija). Ako nije zgodno čuvati uzorke stolice, mogu se uzeti analni brisevi. 4. Uzorak krvi: krv antikoagulans, zapremina za sakupljanje je 5 ml, preporučuje se upotreba vakuumskog krvnog suda koji sadrži EDTA antikoagulant za sakupljanje krvi. 5. Uzorci seruma: pokušajte da sakupite duple uzorke seruma tokom akutne faze i faze oporavka. Prvi serum treba uzeti što je pre moguće (poželjno u roku od 7 dana od početka bolesti), a drugi serum treba uzeti 3 do 4 nedelje od početka bolesti. Zapremina sakupljanja je 5ml, a preporučuje se upotreba vakuumske epruvete za sakupljanje krvi bez antikoagulansa. Uzorci seruma se uglavnom koriste za određivanje antitela, a nema detekcije nukleinske kiseline. 6. Uzorak urina: sakupite urin sredinom jutra, zapremina sakupljanja je 2~3ml. 7. Površinski uzorci: uključujući uvezenu hranu hladnog lanca ili uvezenu robu na unutrašnjoj i spoljašnjoj površini pakovanja, kao i alate za transport i skladištenje i druge delove koji mogu biti kontaminirani prikupljanjem mrlja. 8. Uzorci kanalizacije: U skladu sa distribucijom drenažnog sistema velikih uvezenih lokacija za preradu i tretman smrznute robe u morskoj luci, fokusirajte se na izbor ispusta za kanalizaciju, sakupljanje unutrašnje cevne mreže, nizvodno od toka kanalizacije ili vezu sa opštinskom cevnom mrežom itd. 2 do 3 tačke Uzorkovane su bitovi.
(4) Sakupljanje i obrada uzoraka
1. Bris nazofarinksa: uzorkivač jednom rukom nežno podupire glavu osobe koja se uzima, a drugom drži bris. Bris ulazi u nozdrvu i polako ide duboko duž dna donjeg nosnog prolaza. Pošto je nosni prolaz zakrivljen, to nije prihvatljivo. Prekomerna sila da bi se izbeglo traumatsko krvarenje. Kada vrh brisa dođe do zadnjeg zida nazofaringealne šupljine, lagano ga rotirajte nedelju dana (u slučaju refleksnog kašlja, ostanite neko vreme), zatim polako izvadite bris, a glavu brisa potopite u 2～3ml rastvor za konzervaciju virusa (može i da se koristi izotonični fiziološki rastvor, tečnost kulture tkiva ili fosfatni pufer), odbacite rep i čvrsto zašrafite poklopac.
2. Bris ždrela: osoba koja se uzima treba isprati usta normalnim fiziološkim rastvorom, a osoba koja uzima uzorke će navlažiti bris u sterilnom fiziološkom rastvoru (zabranjeno je stavljati bris u rastvor za konzervaciju virusa kako bi se izbeglo da antibiotici izazovu alergije), a osoba koja se sakuplja Nagnite malo glavu, otvorite usta i napravite"ah" zvuk, otkrivajući krajnike sa obe strane, stavite bris preko osnove jezika, obrišite krajnike sa obe strane osobe sa malo sile najmanje 3 puta, a zatim obrišite gore-dole zadnji farinks najmanje 3 пута. Zatim, uronite glavu brisa u epruvetu koja sadrži 2 do 3 ml rastvora za konzervaciju virusa (može se koristiti i izotonični fiziološki rastvor, tečnost kulture tkiva ili rastvor fosfatnog pufera), odbacite rep i čvrsto zašrafite poklopac epruvete. Bris grla se takođe može staviti u istu epruvetu kao i nazofaringealni bris.
3. Ekstrakt nazofarinksa ili ekstrakt respiratornog trakta: Koristite kolektor povezan sa pumpom negativnog pritiska da biste izvukli sluz iz nazofarinksa ili izvukli respiratorni sekret iz traheje. Ubacite glavu kolektora u nosnu šupljinu ili dušnik, uključite negativan pritisak, rotirajte glavu kolektora i polako izvucite, sakupite izvučenu sluz i jednom isperite kolektor sa 3 ml tečnosti za uzorkovanje (možete koristiti i pedijatrijsku). kateter spojen na špric od 50 ml Alternativni kolektor).
4. Duboki ispljuvak: Nakon što pacijent ima dubok kašalj, sakupite iskašljani sputum u epruvetu za uzorkovanje koja sadrži 3 ml tečnosti za uzorkovanje. Ako se sputum ne sakuplja u tečnosti za uzorkovanje, 2 do 3 ml tečnosti za uzorkovanje se može dodati pre testa ili se može dodati jednaka zapremina digestivnog soka sputuma. Formula rastvora za skladištenje digestivnog soka sputuma prikazana je u tabeli 1.
Kada koristite, razblažite rastvor za skladištenje do 50 ml sa dejonizovanom vodom, pomešajte ga sa istom zapreminom sputuma, ili pogledajte uputstva za upotrebu reagensa, ili koristite jednaku zapreminu sputuma sa 1 g/L fosfatnog pufera koji sadrži proteinazu K za konverziju ispljuvak .
5. Tečnost za ispiranje bronhija: ubacite kolektorsku glavu iz nozdrve ili trahealne šupljine u dušnik (oko 30cm dubine), ubrizgajte 5ml normalnog fiziološkog rastvora, uključite negativni pritisak, okrenite glavu kolektora i polako povucite, sakupite ekstrahovanu sluz, I jednom isperite kolektor rastvorom za uzorkovanje, ili možete koristiti pedijatrijski kateter povezan sa špricem od 50 ml da zamenite kolekciju.
6. Tečnost za alveolarnu lavažu: Nakon lokalne anestezije, fiberoptički bronhoskop ubacite kroz usta ili nos kroz ždrelo u bronh desnog srednjeg režnja ili jezičnog segmenta levog pluća i ukucajte njegov vrh u otvor bronhijalne grane i polako ga dodajte kroz otvor za biopsiju traheje. Bakterijski fiziološki rastvor, 30-50ml svaki put, ukupno 100-250ml, ne bi trebalo da prelazi 300ml.
7. Uzorak stolice: Uzmite 1ml rastvora za obradu uzorka, pokupite uzorak stolice veličine zrna soje i dodajte ga u epruvetu, lagano uduvajte i usišite 3 do 5 puta, ostavite da stoji na sobnoj temperaturi 10 minuta, centrifugirajte na 8000 rpm tokom 5 minuta i apsorbuje supernatant. Detection. Rastvor za tretman fekalnog uzorka može se pripremiti sam, a formula je prikazana u tabeli 2.
HANK'S rastvor ili drugi izotonični fiziološki rastvor, tečnost kulture tkiva ili rastvor fosfatnog pufera takođe se mogu koristiti za rastvaranje uzorka stolice da bi se pripremila suspenzija stolice. Ako pacijent ima simptome dijareje, uzmite 3~5ml uzorka fekalije, nežno pipetirajte da se meša, centrifugirajte na 8000rpm 5 minuta i apsorbujte supernatant za upotrebu.
8. Analni štapić: Koristite sterilni pamučni štapić da ga nežno ubacite u anus 3～5 cm, zatim ga lagano okrenite napolje, odmah ga stavite u epruvetu za uzorkovanje od 15 ml sa spoljnim poklopcem koja sadrži 3～5 ml rastvora za zaštitu od virusa, bacite rep, i rotirati ga. Zategnite poklopac cevi.
9. Uzorci krvi: Preporučuje se upotreba vakuumskih epruveta za sakupljanje krvi koje sadrže EDTA antikoagulant za prikupljanje uzoraka krvi od 5 ml. U zavisnosti od vrste odabranih reagenasa za ekstrakciju nukleinske kiseline, za ekstrakciju nukleinske kiseline koristite punu krv ili plazmu. Da biste odvojili plazmu, centrifugirajte celu krv na 1500-2000 o/min u trajanju od 10 minuta, a supernatant sakupite u sterilnu plastičnu epruvetu sa navojem.
10. Uzorak seruma: Sakupite 5 ml uzorka krvi pomoću vakuumske epruvete za prikupljanje krvi pod negativnim pritiskom, ostavite na sobnoj temperaturi 30 minuta, centrifugirajte na 1500-2000 o/min 10 minuta i sakupite serum u sterilnu plastičnu epruvetu sa zavrtnjem.
11. Površinski uzorci: Pogledajte metodu preporučenu u"Tehničke specifikacije za praćenje životne sredine novog korona virusa na tržištu poljoprivrede (tržišna trgovina) " (WS/T776—2021). Nakon što je bris za uzorkovanje potpuno infiltriran rastvorom za konzervaciju virusa, ponovo ga nanesite na površinu, a zatim nanesite bris. Vratite ga u epruvetu za uzorkovanje i potopite, izvadite i ponovo nanesite uzorak, ponovite više od 3 puta. Višetačkasto distribuirano uzorkovanje vrši se na objektima sa velikim površinama.
12. Uzorci kanalizacije: Pogledajte metode preporučene u"Tehničke specifikacije za praćenje životne sredine novog korona virusa na tržištu poljoprivrede (tržišna trgovina)" (WS/T776—2021). Kada uzimate uzorak kanalizacije, potopite bris u adsorbovanu kanalizaciju i uklonite bris. Vratite cev za uzorkovanje da se natopi, izvadite je i ponovo uronite u kanalizaciju, ponovite više od 3 puta i izvršite distribuirano uzorkovanje na više tačaka za svaku lokaciju za uzorkovanje kanalizacije. Prilikom prikupljanja uzoraka otpadne vode, koristite polietilenske plastične boce da sakupite 1L～1,5L kanalizacije. Za sakupljanje otpadnih voda veće od 1,5 L, možete koristiti polietilenske plastične kante ili specijalnu opremu za obogaćivanje uzoraka vode na licu mesta. Pre sakupljanja uzoraka kanalizacione vode, treba ih dobro izmešati i potom uzorkovati; ako se kanalizacija teško dobro meša i dolazi do raslojavanja, uzorkovanje se može vršiti u slojevima prema proporciji zapremine vode svakog sloja.
13. Ostali materijali: sakupljati prema zahtevima dizajna i specifikacijama.
(5) Pakovanje uzoraka
Nakon što su uzorci sakupljeni, oni se potpakuje u kabinet biološke bezbednosti u laboratoriji za biološku bezbednost drugog nivoa.
1. Sve uzorke treba staviti u epruvetu za sakupljanje uzoraka odgovarajuće veličine sa poklopcem na navoj i zaptivkom unutra, koja je otporna na smrzavanje, i zategnuti. Broj uzorka, tip, naziv i datum uzorkovanja su naznačeni na spoljnoj strani kontejnera. 2. Stavite zapečaćene uzorke u zapečaćenu vreću, svaka vreća je ograničena na jedan uzorak. Zahtevi za pakovanje uzoraka moraju da ispunjavaju odgovarajuće standarde"Tehnička pravila za bezbedan transport opasnih materija vazdušnim putem ". 3. Kada se radi o transportu spoljnih uzoraka, troslojno pakovanje se vrši prema vrsti uzoraka i infektivnim materijama klase A ili B.
(6) Očuvanje primeraka
Uzorke koji se koriste za izolaciju virusa i detekciju nukleinske kiseline treba testirati što je pre moguće. Uzorci koji se mogu testirati u roku od 24 sata mogu se čuvati na 4°C; uzorke koji se ne mogu otkriti u roku od 24 sata treba čuvati na -70°C ili niže (ako ne- Čuvati na 70°C u frižideru na -20°C). Uzorci seruma mogu se čuvati na 4°C 3 dana, a mogu se čuvati duže vreme ispod -20°C. Treba postaviti posebne biblioteke ili posebne šaltere za odvojeno skladištenje uzoraka.
(7) Uzorke dostaviti na uvid
Uzorke treba poslati u laboratoriju što je pre moguće nakon uzimanja, a uzorke ne treba stavljati na sobnu temperaturu (25°C) duže od 4 sata nakon uzimanja. Ako je potreban transport na velike udaljenosti, preporučuje se upotreba suvog leda i drugih metoda hlađenja za skladištenje. Izbegavajte ponovno zamrzavanje i odmrzavanje tokom transporta uzorka.
1. Pošaljite uzorke
Svi prvobitni ili rani slučajevi u lokalnim epidemijama otkriveni u različitim pokrajinama (autonomnim regionima i opštinama), ključni slučajevi vezani za epidemiologiju ranih slučajeva, lokalni slučajevi sa nepoznatim izvorima infekcije, uvezeni slučajevi iz inostranstva, uvezena roba i srodna ekološka pozitivni primerci, itd. Najmanje 2 uzorka treba da se sakupe paralelno, jedan se šalje svakoj pokrajinskoj agenciji za kontrolu bolesti na testiranje, drugi se šalje Kineskom centru za kontrolu i prevenciju bolesti na testiranje i pregled, a obrazac za podnošenje uzorka je u prilogu (videti Dodatak 10-1). Nove reprezentativne sojeve izolovane iz različitih provincija treba odmah poslati u Kineske centre za kontrolu i prevenciju bolesti na pregled i čuvanje.
2. Transport uzoraka i sojeva
(1) Domaći transport novih sojeva koronavirusa ili drugih potencijalno zaraznih bioloških materijala klasifikovan je kao klasa A, a odgovarajući UN broj je UN2814. Ambalaža je u skladu sa PI620 klasifikacijom ICAO dokumenta Doc9284"Tehnička uputstva za bezbedan transport opasnih materija vazdušnim putem" Zahtevi za pakovanje: Uzorci životne sredine pripadaju kategoriji B, a odgovarajući UN broj je UN3373. Ambalaža ispunjava zahteve za klasifikaciju PI650 ICAO dokumenta Doc9284"Tehnička pravila za bezbedan transport opasnih materija vazdušnim putem"; gorenavedena standardna ambalaža se može pozvati za transport drugim prevoznim sredstvima. Prevoz novih sojeva koronavirusa ili drugih potencijalno infektivnih materijala treba da se obavlja u skladu sa"Administrativnim propisima o transportu visokopatogenih mikroorganizama (virusa) vrsta ili uzoraka koji mogu zaraziti ljude" (ranije Naredba Ministarstva zdravlja br. 45) za"Potvrdu o dozvoli za prevoz" .
(2) Međunarodni transport Uzorci ili sojevi novog korona virusa koji se transportuju u međunarodnom saobraćaju moraju biti upakovani na standardizovan način, proći kroz odgovarajuće procedure u skladu sa"Pravilnikom o sanitarnom i karantinu ulaska i Izađite iz posebnih članaka" i ispunite relevantne nacionalne i međunarodne zahteve.
(3) Prijem i upravljanje uzorcima i sojevima virusa. Uzorci transportovani vazdušnim putem stižu na odredišni aerodrom i profesionalnim transportnim vozilima se transportuju do prijemne jedinice. Primerci koji se prevoze kopnom prevoze se profesionalnim vozilima. Prevoznici i primaoci će se baviti uzorcima Dvostruki znak za prijem. Uzorcima i sojevima novog korona virusa treba da upravlja posebna osoba, da tačno evidentira izvor, vrstu, količinu i registraciju broja uzoraka i sojeva, da preduzme efikasne mere kako bi se osigurala bezbednost sojeva i uzoraka i striktno sprečila zloupotreba, zlonamerna upotreba, krađa i krađa. Pljačka, gubitak, curenje i drugi incidenti.
02
Laboratorijsko testiranje na novi korona virus
