Начини да се избегне контаминација ћелија: савети за пипетирање које треба да знате
Међу многим варијаблама које се контролишу у ћелијској култури, једна специфична варијабла утиче на цео експеримент: контаминација. Један фактор који доприноси контаминацији ћелија није увек на радару, и иако може тихо да утиче на здравље ћелије и утиче на податке мерења, то је контаминација пипетирањем.
Избор пипета, врхова за пипете и програма за пипетирање посвећује се мало пажње приликом дизајнирања експеримената. Чак и опште решење (аутоклавирање) за избегавање контаминације пипетирањем можда неће бити тако ефикасно као што се обично верује.
Прво правило ћелијске културе: избегавајте контаминацију. Зашто је стерилна техника толико важна за успешну културу ћелија?
Асептична техника је једини начин да се добију поуздани и поновљиви резултати. Загађење може да утиче на раст ћелија, метаболизам и здравље -- нешто што научници занимају да проучавају. Контаминиране ћелијске линије немају жељена својства и сваки пут функционишу другачије, у зависности од тежине контаминације. Такође, ако загађивачи прерасту у ћелије које вас занимају, можете завршити проучавањем погрешног организма.
Са којим врстама загађивача се научници често сусрећу?
Уобичајени извори контаминације су бактерије, квасац и буђ. У раду на култури ћелија, најтеже је открити и искоренити микоплазму. Мање уобичајене врсте контаминације укључују, на пример, пластичне материје које се излужују у лабораторијском потрошном материјалу.
Који су уобичајени узроци контаминације ћелија?
Уобичајени извор контаминације је лоше пипетирање, као што је употреба контаминираних пипета и врхова без филтера. Поред тога, проблем је и недостатак добре лабораторијске праксе, као што је неадекватна деконтаминација инструмената као што су инкубатори или кабинети за ламинарни проток. Да бисте уклонили микоплазму, потребна је филтрација помоћу филтера 0.1 µм уместо филтера 0.2 µм.
Три контаминације пипетирањем:
1. Контаминација од пипете до узорка: Пипета или врх пипете контаминирају узорак.
Како избећи:
Користите стерилне врхове филтера да спречите контаминацију тела пипете.
Промените врх пипете након сваког узорка.
Пипете редовно аутоклавирајте или стерилишите етанолом. Изаберите пипету компатибилну са аутоклавом.
2. Контаминација од узорка до пипете: Пипетирање узорка у тело пипете контаминира пипету.
Како избећи:
Користите врхове филтера или врхове са позитивним померањем да спречите да узорци уђу у тело пипете.
Приликом пипетирања држите пипету у вертикалном положају. Чувајте пипету усправно.
Нагните боцу приликом пипетирања.
Отпустите дугме полако да бисте избегли прскање узорка у пипету. Изаберите пипету опремљену функцијом меког избацивања.
3. Контаминација између узорака: Преостали узорци пипетирањем се преносе у следећи узорак. Обично се јавља када се исти врх користи више пута.
Како избећи:
Промените врх пипете након сваког узорка.
Користите врхове филтера или врхове са позитивним померањем како бисте спречили да узорак уђе у тело пипете и пређе на следећи узорак.
Уверите се да је врх пипете запечаћен на пипети да бисте избегли цурење узорка. На пример, савет Ионгиуе Медицал.
Постоје ли фактори контаминације којих научници можда нису ни свесни?
Ефикасност аутоклавирања често није проверена, а ако аутоклав не ради како треба, врхови аутоклавираних пипета можда нису стерилни. Претходно стерилисани филтери умотани у заштитну амбалажу су најбезбеднија опција за спречавање оваквих незгода. Процес предстерилизације за висококвалитетне врхове пипета се редовно проверава како би се осигурала ефикасност предстерилизације.
Како алати за пипетирање и дозирање олакшавају научницима руковање узорцима у стерилном окружењу?
Одабир правих пипета и врхова за пипете може олакшати асептични радни ток. Ионгиуе медицинске пипете се лако чисте и отварају без алата, што убрзава свакодневно чишћење. Пошто је аутоклавирање ефикасније у уклањању контаминације од марамица са етанолом, Сарториус механичке пипете су потпуно аутоклавиране, што значи да можете поуздано деконтаминирати своје пипете. Мекано избацивање врха спречава потенцијални ризик од прскања контаминације када се врх избаци. Претходно стерилисани врхови филтера штите ваше узорке од унакрсне контаминације. Ионгиуе медицински врхови су такође упаковани у непропусно паковање, што значи да било каква контаминација под условима складиштења и испоруке неће доћи у контакт са врховима или кутијом за врхове.
Како научници могу да избегну загађење? Који су ваши најбољи савети за стерилан рад?
Прво, добра лабораторијска пракса и пажљиво планирање радних корака. Обавезно држите само оно што је потребно за одређени ток рада у кабинету за ламинарни проток и користите једну ћелијску културу у исто време. Поред тога, редовно тестирање на загађиваче као што је микоплазма даје вам мир и поверење у ваше резултате. Када радите у стерилним условима, новац потрошен на претходно стерилисане врхове филтера и стерилне реагенсе вреди новца.
