Данас, хајде да причамо о кључном елементу у ПЦР експериментима - потрошном материјалу. Као чест посетилац ПЦР-а, неопходно је разумети карактеристике и терминологију која се односи на ПЦР потрошни материјал.
На тржишту постоји велики избор потрошног материјала за ПЦР, укључујући брендове, спецификације, боје итд., који су заслепљујући. Хајде да то разумемо корак по корак.
пцр плоча
1. Материјали
Обично је сировина ПЦР потрошног материјала полипропилен. То је добар инертни материјал отпоран на топлоту. Опсег радне температуре је од -30 до 140 степени, што му омогућава да издржи промене топлотне енергије током термичког циклуса ПЦР реакције и игра добру улогу у заптивачу и заштити супстанци у систему ПЦР реакције.
Сазнајте више о полипропилену
2. Боја
Уобичајене су беле епрувете и провидне ПЦР епрувете. У традиционалним ПЦР експериментима, нема разлике између њих. Међутим, у истом експерименту у реалном времену/кПЦР, беле епрувете су биле релативно осетљивије и конзистентније за кПЦР инструменте са апикалним очитањима сигнала (погледајте слике А и Б испод). зашто је овако?
пцр цев
О: ниже вредности Цт за беле епрувете у поређењу са прозирним епруветама; Б: боља поновљивост са белим цевима.
Основни податак кПЦР-а је вредност Цт, а сигнал флуоресценције је извор података за израчунавање вредности Цт, тако да је веома важно да ли се флуоресценција у цеви може у потпуности пренети на детектор. Бели зид цеви спречава да флуоресценција прође кроз зид цеви и да се преломи (слика А испод), чиме спречава да се флуоресценција пренесе на грејни блок (тј. зид металне рупе где је цев постављена) и да се апсорбује или недоследно рефлектује блок. Јачи и концентрисанији флуоресцентни сигнал је сакупљен на врху беле цеви у поређењу са прозирном цеви (слика Б испод).
пцр цев
О: Тренд промене флуоресцентног сигнала у провидној цеви и белој цеви; Б: Поређење интензитета флуоресценције након додавања исте количине флуоресцеина.
Дакле, ако користите кПЦР инструмент са најбољим очитавањем, пробајте беле епрувете.
3. Квалитет (Леан ор Нот Леан)
Овде је наглашен значај квалитета потрошног материјала. кПЦР потрошни материјал мора бити без загађивача и инхибитора. Висок притисак и зрачење уклањају бактерије и ДНазе, али не и прашину и остатке ДНК, који могу инхибирати ПЦР реакције или произвести неспецифично појачање. Супстанце имају апсорпцију, па чак и ситни загађивачи ће апсорбовати флуоресценцију у реакционом систему и утицати на прикупљање флуоресцентних сигнала. Преувеличана верзија експеримента је коришћена да се демонстрира ефекат контаминације нечистоћама на експеримент. Као што је приказано на слици испод, нечистоћа је стављена у један од реакционих бунара октаве. Као што се очекивало, криве амплификације су показале изражене аномалије.
Нечистоће у ПЦР реакционим епруветама
↑ Нечистоће у реакционој цеви
8 трака
↑ Поновљени резултати реакције за 8 епрувета, нечистоћа левог бунара „одступа“ од криве.
Подсетник: Пазите да потрошни материјал не излажете ваздуху дуже време. Након што извадите потрошни материјал, обавезно брзо затворите кесу за паковање да је не бисте додирнули голим рукама. Ако је могуће, радите на чистој клупи.
4. Капацитет / Величина / флукс
Запремина одређује колико се узорка (реакциона запремина) може учитати. Предозирање може довести до смањене ефикасности преноса топлоте, просипања или унакрсне контаминације; премало дозирања може довести до губитка узорка испаравањем. Блок за грејање кПЦР инструмента ће такође одредити применљиви потрошни материјал и применљиву величину реакционог система. Пропусност је лако разумљива, то је максималан број узорака који се може учитати у једном експерименту. Уобичајене спецификације капацитета и флукса су приказане у табели испод:
Једна епрувета/осам редова {{0}}.2мЛ, 0.1мЛ
{{0}}плоча за бунар 0.2мЛ, 0.1мЛ
{{0}}плоча са бунарима 0,2мЛ
Спецификације капацитета су такође генерално подељене на стандардне и ниске типове, као што је приказано у наставку. Потрошни материјал ниског профила има мању висину. Овај кратки дизајн минимизира простор изнад реакционог система („мртва запремина“ – бескорисни део), смањује ефекте испаравања током термичког циклуса и омогућава модулу грејања да се омота око њега у већој мери како би се побољшала ефикасност преноса топлоте. Због тога су цеви ниског профила познате и као "брзе" цеви или плоче.
пцр цев
Подсетник: Обично коришћена реакциона запремина је 20 µЛ и препоручује се употреба реакционе цеви мале запремине од 0,1 мЛ или мале запремине.
5. Дебљина зида
Дебљина зида цеви директно утиче на топлотну проводљивост. Потрошни материјал за ПЦР треба да има уједначену дебљину зида како би се обезбедио конзистентан пренос топлоте. Ултра-танки зид цеви је 50 одсто тањи од стандардне верзије, што додатно смањује термичку баријеру и доноси брже и боље ефекте одзива. Стога, како би се максимизирала ефикасност ПЦР реакција и осигурале стабилне и ефикасне реакције, уједначени и ултра-танки ПЦР потрошни материјали су најбољи избор.
6. Транспарентност
Поклопци и заптивне фолије за кПЦР захтевају високу оптичку јасноћу како би се обезбедила оптимална пенетрација и пренос флуоресцентних сигнала уз истовремено смањење изобличења (за кПЦР инструменте који се читају на врху). Што је већа транспарентност зида цеви, то може утицати на експерименталне резултате. Разлог је објашњен горе. Традиционални ПЦР може занемарити ову функцију.
7. Сукње
Руб ПЦР плоче се односи на периферни наставак плоче. Приликом изградње реакционих система, сукња делује као стабилна подршка за процесе пипетирања и обезбеђује механичку чврстоћу и приањање у комбинацији са аутоматизованим радним станицама. Постоје три уобичајена типа сукњи, полусукње и пуне сукње (одговарају А, Б и Ц на слици испод).
Скиртлесс: Може се користити са већином ПЦР или кПЦР инструмената, али не и за аутоматизоване апликације. Лако се помера током пипетирања, није баш стабилно, потребно је користити са држачем плоче.
Полу сукње: Идеално за аутоматизоване апликације са добром стабилношћу пипетирања.
Пуна подлога: Идеална за аутоматизоване апликације. Добра механичка чврстоћа, погодна за ПЦР инструменте са избоченим модулима, висока стабилност током пипетирања.
пцр плоча
Савети: Значај сукње је више да олакша индустријализацију и аутоматизовану серијску обраду, у комбинацији са роботском руком. Можда неће бити потребно у традиционалним истраживачким лабораторијама, ниједна сукња није довољна.
пцр плоча
8. Парафилм
Заптивни филм за ПЦР плоче је направљен од провидне пластичне или алуминијумске фолије. Адхезивни прозирни филмови су чешћи, погодни за плоче са 96 или 384 јажица, и треба да имају довољно добру пропусност светлости. Приликом заптивања филма, мала картица ће се користити за притискање филма око отвора за заптивање како би се избегло цурење ваздуха.
Адхезивне алуминијумске фолије могу бити мање уобичајене. Иако није погодан за кПЦР, идеалан је потрошни материјал за узорке осетљиве на светлост. Пошто се може пробушити, олакшава пренос узорка у ПЦР (за конвенционални ПЦР).
Заптивни филм за ПЦР плоче
Резимирати
Као носилац ПЦР система, потрошни материјал је веома важан за побољшање квалитета експерименталних података. Надам се да вам ово дељење може помоћи да разумете неке савете о ПЦР потрошном материјалу и пружите помоћ за бољи избор потрошног материјала.
