Као што сви знамо, типови ћелија узгајаних у лабораторији могу се грубо поделити на два типа: адхерентне ћелије и ћелије суспензије, а само неколико типова ћелија постоји у оба стања.
Суспензиране ћелије се односе на врсту ћелија које могу да расту у суспендованом стању у медијуму без ослањања на ослонце, као што су лимфоцити и већина ћелија из крвног система. (као што су ћелије леукемије миша ВЕХИ-3, ћелије хумане леукемије К-562, ХЛ-60). У индустрији, све више адхерентних ћелија је припитомљено и култивисано у потпуној суспензији. Тренутно се СП2/0, НС0, ЦХО, БХК и ХЕК293 ћелије углавном користе у индустрији, а углавном се користе за производњу рекомбинантних протеина; ћелије пролаза које се обично користе у ветеринарским биолошким производима углавном укључују БХК21 ћелије култивисане у пуној суспензији, МДЦК ћелије; и Веро ћелије, ПК ћелије, СТ ћелије, Марц145 ћелије, итд. уз помоћ суспензијске културе микроносача, свака ћелија има различите карактеристике.
Суспензивне ћелије
Ћелије суспензије „тхп-1“ 200к
Генерално, суспензијским ћелијама је лакше руковати него адхерентним ћелијама јер није потребна трипсинизација за пролаз ћелија суспензије. Али то не значи да се ћелије суспензије лакше узгајају од адхерентних ћелија. За почетнике, то је изазовније. Увек постоје различити проблеми: на пример, зашто се увек појављују мртве ћелије и диференцијација ћелија; договорено је да је пролаз лак, али ће резултат бити диференцијација; проблеми се поново јављају након криопрезервације и опоравка!
Затим, хајде да разговарамо о неким кључним тачкама о култивисању ћелија суспензије~
Тачка 1: Доста стрпљења, неопходно је
Многе ћелије суспензије имају релативно слабу одрживост када се тек опораве од криопрезервације. У овом тренутку, морамо бити довољно стрпљиви да сачекамо да ћелије заврше своју самопоправку и уђу у фазу логаритамског раста. На пример, ТХП-1 (хумана моноцитна леукемија) често треба 7-10 дана периода опоравка од одмрзавања до нормалне пролиферације; Јуркат, клон Е6-1 (ћелије хумане Т лимфоцитне леукемије) такође треба 5-7 дана након опоравка. Вратите у стање пре замрзавања. Почетници могу одустати од тренинга током овог периода, па будите стрпљивији! Неговање таквих ћелија је такође процес неговања стрпљења!
Тачка 2: Ухватите густину инокулације
Уопштено говорећи, густина ћелија суспензије не би требало да буде мања од 500,000/МЛ. Многе ћелије суспензије зависе од густине, а непролиферација узрокована ниском густином је такође један од уобичајених проблема за почетнике. Наравно, постоји врло мало ћелија чије се стање погоршава када је густина висока, као што је В6/32 (ћелије хибридома Б ћелија миша). Због тога је веома важно тражити релевантне информације да бисте схватили карактеристике ћелија пре него што се култивишу непознате ћелије. Само познавајући себе и непријатеља можете добити све битке!
Учесталост замене медија не би требало да буде ограничена на "јасно". Ћелије су жива бића. Током континуираног циклуса културе, специфични хранљиви састојци као што су додатни медијум и глукоза могу се додати неколико пута у зависности од статуса раста ћелија да би се одржао добар статус ћелија. . Током процеса суспензијске културе, са пролиферацијом ћелија, потрошњом хранљивих материја у изворном медијуму и повећањем метаболита, виталност ћелија ће се смањити, а благовремени додатак хранљивим материјама ће ћелије учинити релативно добрим животним окружењем. Овде нећу улазити у детаље и избегавати често центрифугирање и замену течности.
Хајде да разговарамо о методи замене течности:
①Центрифугални метод пуне замене течности
То јест, уклоните сав стари медијум центрифугирањем (800-1000о/мин, 5 мин) и замените га новим. Ова метода је погодна за замену средњег слоја добро подигнутих ћелија суспензије "чврсте коже" (као што је К562), или тренутну ситуацију у којој су ћелије у добром стању и велика је густина, што резултира великом потрошњом медијума. Предност ове методе је у томе што се подлога темељно мења и може се уклонити део ћелијских остатака, али ће такође изазвати одређени степен механичког оштећења ћелија.
②Центрифугални метод полуизмена
То јест, центрифугирањем (800-1000о/мин, 5 мин) 50% суспензије ћелија, замените 50% запремине свежег медијума. Овај метод је погодан за упоређивање „лицемерних“ ћелија које је тешко култивисати (као што је тхп-1), или ситуације у којима је густина ниска, али је потребно уклонити више остатака у стању прилагођавања.
③Метода размене седиментационе течности
Односно, уместо центрифуге, метода природног таложења гравитацијом се користи за одвајање медијума од ћелија, тако да се замени цео или део свежег медијума. Међутим, он има ограничења у примени — погодан је само за ћелије које могу да формирају ћелијске кластере одређене величине (иначе се не могу природно наталожити и могу се центрифугирати само при малој брзини), посебно када се ради о ћелијама које се ослањају на агрегацију ћелија да би се размножавале , као што су НК-92, НК- 92 МИ, Јуркат. Овај метод може да минимизира механичка оштећења изазвана процесом центрифугирања током процеса размене течности, док задржава агрегирану ћелијску масу, а уклањање ћелијских остатака је релативно темељно.
Након што сте савладали горе наведене тачке, плус добро семе ћелија, одмах је иза угла да расте „прелепе“ ћелије суспензије!
плоча за културу ћелија
Ионгиуе Медицал плоча за ћелијску културу у облику слова У се углавном користи за култивисање ћелија суспензије, користећи полистирен (ПС), произведен у радионици за пречишћавање од 100000- нивоа, стерилисан зрачењем, без ДНазе, РНазе и пирогена -бесплатно, Безбедност и заштита животне средине.
Плоче за ћелијске културе доступне су у различитим спецификацијама како би се задовољиле потребе различитих бактеријских култура. Типови производа су подељени на 6-добро, 12-добро, 24-добро, 48-добро, 96-добро и 384-добро, који 96-бунар је подељен на равно дно, У-дно, В-дно дно; Плоче за културу у облику слова У се углавном користе за култивисање ћелија суспензије; Плоче за културу у облику слова В се углавном користе за експерименте имунолошке хемаглутинације.
