Често постоје проблеми ове или оне врсте у процесу ћелијске културе. Не потцењујте ћелијску културу, али она садржи универзитетска питања. У комуникацији са корисницима наћи ћете многе проблеме који се могу избећи. Следеће су уобичајене у процесу ћелијске културе. Анализирајте узрок абнормалности.
Петри шоља
1. Култивисане ћелије се не лепе за зид
могући разлог
1. Прекомерно варење трипсина;
2. Контаминација микоплазмом;
3. пХ вредност медијума је превише алкална (разлагање НаХЦО3);
4. Старење ћелија;
5. Почетна концентрација инокулисаних ћелија је прениска или превисока.
Решење
1. Скратити време варења трипсина или смањити концентрацију трипсина;
2. Изоловати културу и открити микоплазму. Очистите постоље или инкубатор. Ако се пронађе контаминација микоплазмом, баците културу;
3. Користите стерилни раствор сирћетне киселине да подесите пХ или напуните стерилним ЦО2;
4. Омогућавање нових конзервационих ћелија;
5. Подесите оптималну концентрацију инокулисаних ћелија.
2. Груписање ћелија суспензије
могући разлог
1. Подлога за културу садржи јоне калцијума и магнезијума;
2. Контаминација микоплазмом;
3. Прекомерно варење протеазом изазива лизу ћелија;
4. Контаминација ДНК.
Решење
1. Оперите ћелије избалансираним раствором соли без калцијума и магнезијума и нежно дувајте и сишите
2. Ћелије добијају једну ћелијску суспензију;
3. Одвојите културу и откријте микоплазму;
4. ДНасел третман ћелија.
3. Култивисане ћелије расту споро
могући разлог
1. Услед замене различитих подлога или серума;
2. Неке компоненте неопходне за раст ћелија у медијуму културе, као што су глутамин или фактори раста, су исцрпљене или недостају или су уништене;
3. У култури постоји мала количина бактеријске или гљивичне контаминације;
4. Неправилно складиштење реагенса;
5. Почетна концентрација инокулисаних ћелија је прениска;
6. Ћелије су остареле;
7. Контаминација микоплазмом.
Решење
1. Упоредите састав новог медијума и оригиналног медијума, упоредите нови серум и стари серум да бисте подржали експерименте раста ћелија и пустите ћелије да се постепено прилагоде новом медијуму;
2. Пребацити у свеже припремљену подлогу за културу, или додати глутамин и факторе раста;
3. Користите подлогу за културу без антибиотика, ако се утврди да је контаминирана, баците културу;
4. Серум треба да се чува на -10 до -20 степена. Подлога за културу треба да се чува на 2-8 степени у мраку. Комплетан медијум за културу који садржи серум треба да се чува на 2-8 степену и да се потроши у року од 1 недеље;
5. Повећати почетну концентрацију инокулисаних ћелија;
6. Промена у нову конзервациону ћелију;
7. Изолујте културу и откријте микоплазму. Очистите постоље и инкубатор. Ако се пронађе контаминација микоплазмом, баците културу.
Четврто, култивисане ћелије слабо расту
могући разлог
А. Стање саме ћелије
1. Број ћелијских пролаза је велики, а ћелије старе;
2. Количина инокулације ћелије: прениска количина инокулације, спор раст ћелија;
3. Пролазак ћелија касни: тровање ћелија, које утиче на раст ћелија након проласка;
4. Време варења трипсина је предуго или прекратко: ако је време предуго, ћелије умиру; ако је време прекратко, ћелије се не раздвајају у потпуности у кластере и ћелије умиру;
5. Криопрезервација и опоравак ћелија: споро замрзавање и тренутна лиза.
Б. Загађење
1. Контаминација микоплазмом;
2. Контаминација плесни.
Ц, медијум за културу или серум
1. Нема валидације пре замене серума или медијума;
2. Да ли је одабрани медиј погодан;
3. Да ли је припрема медијума одговарајућа;
4. Да ли је припрема медија тачна.
Д. да негује околину
1. Да ли је снабдевање ЦО2 нормално?
2. Температура инкубатора или шејкера је правилно контролисана.
Решење
Према горе наведена четири могућа разлога, донети циљана решења
1. Обратите пажњу на стање ћелија: као што је број пролаза, количина инокулације итд.;
2. Избегавајте загађење (користите обичан, легалан и следљив серум);
3. Користите одговарајући серум или медијум, по могућности проверен;
4. Обратите пажњу на лабораторијско окружење.
Могући узроци ћелијске смрти у култури
1. У инкубатору нема ЦО2;
2. Температура у инкубатору превише варира;
3. Ћелије су оштећене током криопрезервације или опоравка;
4. Осмотски притисак медијума културе је нетачан;
5. Акумулација токсичних метаболита у медијуму културе.
Решење
1. Открити ЦО2 у инкубатору;
2. Проверите температуру у инкубатору;
3. Узмите нову очувану ћелијску врсту;
4. Открити осмотски притисак медијума за културу;
5. Пребацити у свеж медијум;