Наше методе рада, детаљи и теоријска објашњења постаће смернице за ваш рад, као што је постављање хранљивих раствора и ћелијских тиквица; процедуре стерилизације; Да бисте научили њихов правилан рад, потребно је обратити пажњу на њих први пут.
Неговање ћелија попут подизања деце
Ћелије су заиста крхке. Најбоље је да га проверавате сваки дан како бисте спречили абнормалне појаве као што су недостатак воде, угљен-диоксид, нестанак струје и недовољна температура у инкубатору. Такође је неопходно на време решити ове незгоде како би се избегли већи бол изазвани поновљеним експериментима. .
Добре ћелије треба засијати на време
Ћелије се пролазе у серијама, тако да чак и ако једна серија не успе, постоји резервна. Можда неће бити лако за просечну особу као што је овај други. Али ово је лекција моје крви. Када су ћелије биле контаминиране, цела војска је збрисана. У то време жалим што нисам заштитио семе.
Свака ћелија има своје карактеристике и треба је третирати другачије.
Ћелије су исте као и људи, а различите ћелије имају различите карактеристике културе. Будите пажљиви у процесу узгоја. Различите ћелијске линије користе различите медије и серум.
На пример, ћелије глатких мишића које подижем су веома активне и воле да буду живахне. За 2-3 дана биће велика популација, а ја не волим много да једем и пијем. То је заиста најбоље дете за подизање. Ендотелне ћелије и ћелије глатких мишића имају сличне личности, али су веома нехигијенске и аљкаве. У њима има много секреторних ћелија, па их је потребно често мењати и прати. Ћелије РАВ264.7 су такође веома веселе и врло јестиве. Потребно их је често хранити. Главобоља је што се ћелије лако активирају. Добро је што су боца и средина у којој се узгајају без ендотоксина, али је мени као мајци тешко да их задовољим.
Припрема за рад пре тренинга
Укључујући руковање потрошним материјалом, конфигурацију реагенса, тестирање стерилности итд.
Чишћење стакленог посуђа. За стаклено посуђе (боца за ћелију, боца са хранљивим раствором, мала боца пеницилина, итд.), прво користите прашак за прање за чишћење (обратите пажњу на мртве углове), а затим исперите. Потопите у раствор киселине дуже од 24 сата, а затим исперите чистом водом 10 пута да бисте уклонили заостали раствор киселине. Боце и сл., током испирања снажно протресите. Затим потопити у двоструко дестиловану воду 24 х. Након сушења, умотајте га и сушите на 160 степени 2 сата.
Конфигурација реагенса. Као течност за ћелијску културу, генерално се може користити више од двоструко дестиловане воде. И обратите пажњу на подешавање пХ вредности.
Тестирање стерилности. Углавном користите филтерску стерилизацију: као што су трипсин, антибиотици, раствор Г-418, различити медијуми, натријум пируват, глутамин, итд. Неки се могу аутоклавирати: ПБС, Д-Ханков, итд.
Реагенси се чувају у аликвотима
Укључујући хранљиви раствор, панкреатин, серум итд.
Серум је посебно важан. Серум мора да се чува на -20 степену. Ако се једна боца не може потрошити одједном, 40-50мл се може дозирати у стерилне боце третиране киселином или чак чувати у боцама пеницилина. Генерално, серум који је обезбедио произвођач је стерилан и не захтева стерилну филтрацију. Ако се у серуму нађе много суспендованих материја, серум се може додати у медијум и заједно филтрирати, а серум не треба директно филтрирати. (Нема утицаја на ћелијску културу под нормалним околностима)
Флаширани серум мора се постепено одмрзнути: фрижидер од 4 степена се потпуно раствори и затим подели у паковање. Током процеса растварања, мора се редовно мућкати (пазити да се не појаве мехурићи ваздуха) како би се температура и састав уједначили и смањила појава падавина. Немојте одмрзнути директно од –20 степени до 37 степени, јер се температура превише мења, што може лако изазвати коагулацију протеина и таложење.
Инактивација топлоте се односи на загревање потпуно одмрзнутог серума на 56 степени у трајању од 30 минута. Након што се водено купатило подигне на 56 степени, ставите серум, сачекајте да температура порасте на 56 степени и одбројите време, углавном га протресите једном на сваких 5 минута. Сврха овог топлотног третмана је да се деактивирају компоненте комплемента у серуму. Осим ако није неопходно, ова топлотна обрада се углавном не изводи јер ће изазвати значајно повећање седимента и утицати на квалитет серума. Обратите пажњу на ефекат промене серума (укључујући различите серије) на ћелије.
Јак осећај стерилности
Пре експеримента, ултра чиста клупа је стерилисана УВ зрачењем 30 минута, асептична радна површина је обрисана са 70 процената етанола, а вентилатор ултра чисте клупе је укључен неколико минута пре него што је експериментална операција почела .
Да бисте сазнали више о лабораторијској култури ћелија, кликните на: хттп://ввв.схјасв.цом/